Ang “New Coronary Virus Pneumonia Diagnosis and Treatment Program (Trial Ninth Edition)” ay gumagamit ng nucleic acid detection Ct value ≥35 bilang isa sa mahalagang batayan para sa pagpapalabas ng isolation management o discharge.Kaya, ano ang kinakatawan ng Ct value ng nucleic acid detection kit?Naihahambing ba ang mga halaga ng Ct ng iba't ibang kit?Kung mas mababa ba ang halaga ng Ct, mas mahusay ang pagganap ng kit?
Ang halaga ng Ct (Threshold Cycle, Ct) ay ang bilang ng mga PCR cycle kapag ang intensity ng real-time na fluorescence quantitative fluorescence signal ay lumampas sa itinakdang threshold.Ang mga nucleic acid detection kit ay kinuha ang bagong korona bilang isang halimbawa.Para sa parehong reaksyon ng parehong kit upang makita ang dalawang sample na naglalaman ng virus, A at B, ang laki ng halaga ng Ct ay kumakatawan, sa isang tiyak na lawak, ang bilang ng mga kopya ng viral gene, iyon ay, ang viral load.Kung mas mababa ang Ct ng sample B, mas mataas ang viral load.Ang halaga ng Ct ay inversely proportional sa viral load at pagkahawa nito.Ang mga kalamangan at kahinaan ng iba't ibang real-time na fluorescence quantitative kit ay hindi maaaring hatulan lamang sa laki ng Ct value, dahil ang mga Ct value ng iba't ibang kit ay hindi maihahambing.Ang pagsusuri sa pagganap ng kit ay kailangang masukat mula sa mga aspeto ng sensitivity (minimum na limitasyon sa pagtuklas), specificity, precision, stability, at diagnostic application.Ang bawat tagagawa ng reagent ay may sarili nitong labingwalong uri ng martial arts, at mayroon silang sariling mahiwagang kapangyarihan sa aplikasyon, kaya hindi ko na iisa-isahin dito.
Para sa maginoo na real-time na quantitative PCR (QPCR) analysis instruments/systems, pamilyar sa lahat ang pagkuha ng mga Ct value at ang malawakang paggamit ng mga ito sa pathogen detection application.Sa pag-unlad ng industriya at pagsulong ng teknolohiya, ang mga kagamitan at reagents ng QPCR ay nakatagpo ng mga pagkakataon at hamon.Sinuri ng Yiou Think Tank (2021 Research Report on China's Genetic Testing Industry: Technology) na karamihan sa mga kumpanya sa industriya ng QPCR ng aking bansa ay nahaharap sa mga karaniwang problema batay sa teknolohiya.Bilang tugon sa mga problemang ito, ang mga solusyon ay pangunahing nahahati sa dalawang uri: pagpapabilis ng pagpapabuti ng teknolohiya at pag-deploy ng mga bagong teknolohiya.
Ang POCT para sa QPCR molecular diagnosis ay isa sa mga direksyon ng pag-unlad ng industriya, at ang pagpapabuti ng pagganap ay isang mahalagang kadahilanan upang mapabilis ang aplikasyon ng teknolohiya.Para sa POCT equipment na may single-sample throughput ng QPCR, paano i-optimize ang Ct value ng key parameter ng isang reaksyon sa R&D?Ang parehong kagamitan, ang parehong sistema ng reaksyon, at ang parehong konsentrasyon ng template, ayon sa teorya ay mas malaki ang halaga ng Ct ng isang reaksyon, mas mababa ang kahusayan ng enzyme sa reaksyon.
Sa proseso ng pagpapabuti ng kahusayan ng reaksyon ng enzyme at pag-optimize ng halaga ng Ct, maaaring masuri muna ang isang tipikal na 40 PCR cycle fluorescence quantitative amplification curve.Ang amplification curve sa figure sa ibaba ay nahahati sa fluorescence background phase, exponential amplification phase, linear phase, at plateau phase.Upang makamit ang isang mas mababang background ng fluorescence, hangga't maaari upang makilala ito mula sa halaga ng fluorescence ng maagang exponential amplification, kinakailangan na subukan mula sa carrier ng mga consumable ng reaksyon, screening ng disenyo ng primer probe, at system buffer ng reaksyon.Ang exponential amplification period ay ang pinakadirektang reaksyon ng aktibidad ng enzyme, at ito rin ang patunay ng perpektong koordinasyon ng POCT equipment, reaction carriers at reagents.Sa oras na ito, ang kontrol sa temperatura ng kagamitan, pagkuha at pagsusuri ng optical signal, biocompatibility ng carrier, at performance ng system ng mga reagents ay kailangang isaayos at masuri sa lahat ng aspeto.Sa wakas, ang buong amplification ay nakumpleto, at ang mga resulta ay dapat ipakita sa pamamagitan ng isang mahigpit na algorithm ng data upang makakuha ng isang makatwirang halaga ng Ct.
Ang isang maliit na hakbang sa pag-optimize ng halaga ng Ct ay ang hindi mabilang na mga hakbang ng mga tauhan ng R&D.Sa pagkabalisa at pananabik sa araw at gabi, sa tuwing "ang mga bundok at ilog ay hindi makikita, ang mga willow ay madilim at ang mga bulaklak ay maliwanag at may isa pang nayon", na nagbibigay sa atin ng lakas ng loob at simbuyo ng damdamin upang sumulong. muli.
Oras ng post: Set-29-2022